タンパク質を分離・精製する方法にはどのようなものがありますか？

日常生活では、体の一部の構造成分や分子量成分についてあまり知りません。この理解不足のため、人々はそれらを認識せず、それがいくつかの意見の相違を引き起こし、人体に影響を与えます。実際、タンパク質の分離と精製の方法は、分離方法と成分の具体的な組み合わせを理解することによって適切に判断できます。この側面を理解することによってのみ、それが何で構成されているかを知ることができます。

分離方法

透析は、透析バッグを使用して大きな分子タンパク質を小さな分子化合物から分離する方法です。

限外濾過

タンパク質溶液を濃縮する目的を達成するために、正圧または遠心力を使用して、タンパク質溶液を特定の分子量カットオフを持つ限外濾過膜に通過させます。

アセトンやエタノールなどの有機溶媒を用いた沈殿法は、タンパク質の水和層を破壊し、0～4℃の低温でタンパク質を沈殿させることができます。高い周囲温度などの悪影響要因の影響により、有機溶媒はタンパク質の変性を引き起こす可能性があります。

塩沈殿は、タンパク質溶液に硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、または塩化ナトリウムを添加して、タンパク質の表面電荷を中和し、水和膜を破壊して、タンパク質を沈殿させるプロセスです。

免疫沈降法：特定の抗体が対応する抗原タンパク質を認識し、抗原抗体複合体を形成する性質を利用して、タンパク質混合溶液から抗原タンパク質を分離します。

電気泳動: タンパク質は、pI より高いまたは低い溶液中で荷電粒子となり、電界内で正極または負極に向かって移動します。タンパク質を電界内で移動させることによって分離する技術は、電気泳動と呼ばれます。いくつかの重要なタンパク質電気泳動:

電気泳動操作

SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動は、タンパク質の分子量を決定するためによく使用されます。

等電点電気泳動法は、等電点の違いに基づいてタンパク質を分離する電気泳動法です。

2次元ゲル電気泳動はプロテオミクス研究において重要な技術です。

クロマトグラフィー：分離対象となるタンパク質溶液（移動相）が固体（固定相）を通過する際、分離対象となるタンパク質の粒子サイズ、電荷、親和性に応じてタンパク質成分が2相に繰り返し分配され、異なる速度で固定相を流れてタンパク質を分離します。ゲル濾過（分子ふるい、ゲル濾過、排除クロマトグラフィー）：分子サイズに基づいてタンパク質を分離します。

イオン交換：タンパク質の電荷と特性が異なります。

陽イオン交換体: CMセルロース

陰イオン交換体: DEAEセルロース

アフィニティークロマトグラフィー：抗原-抗体、リガンド-受容体、金属イオン、ビオチンなど。

高速液体クロマトグラフィー（HPLC）：逆相HPLC、イオンHPLC、ゲルろ過HPLC

超遠心分離: 分子量と形状に基づいてタンパク質を分離します。