唾液アミラーゼの最適pHを決定する方法

唾液アミラーゼ（膵アミラーゼ）は唾液腺から分泌される加水分解酵素です。唾液中のアミラーゼによってデンプンは加水分解され、デキストリンと麦芽糖が生成されます。唾液アミラーゼの最適 pH を知っておくのは良いことですが、唾液アミラーゼの最適 pH とは何でしょうか。また、唾液アミラーゼの最適 pH を測定するにはどうすればよいでしょうか。

基質過剰の条件では、同じ時間、同じ温度、酵素濃度の条件で、反応系で消費されるデンプンの量は、最適 pH に近いほど最大になります。残留デンプンと過剰ヨウ素溶液によって生成される色が薄いほど、吸光度は小さくなります。分光光度計で各チューブの吸光度を測定した後、増加傾向と減少傾向の間のより小さい吸光度範囲に対応する pH 値が、唾液アミラーゼの最適 pH です。

1. 材料と方法器具：ピペット（5mL、1mL）、試験管、試験管立て、小型ビーカー、722型分光光度計、恒温ボックス、耳吸引球試薬：0.01mol/Lヨウ素溶液、0.2mol/Lリン酸水素二ナトリウム、0.2mol/Lリン酸二水素ナトリウム、デンプン溶液、唾液、蒸留水

2.方法：同じ時間、同じ温度、酵素濃度、異なるpH条件下では、酵素活性が異なり、加水分解されるデンプンの量が異なり、残留デンプンと過剰のヨウ素溶液によって生成される色が異なります。660nmでの吸光度を測定することにより、酵素の最適pH範囲が得られます。

手順:

1. 唾液の採取：蒸留水でうがいをした後、蒸留水を口に含みます。適切な時間後、蒸留水と唾液をあらかじめ用意した容器に入れます。実験中は、酵素の失活に注意する必要があります。これを防ぐために、液体を氷水で冷やす必要があります。

2.異なるpH緩衝液の調製：以下の表に従って、異なるpH値の緩衝液10mlを調製する。

3. デンプンの量を決定します（色の変化をよりよく観察するために、適量の蒸留水を加えて総量を同じにします。よく混ぜて現象を観察し、色の変化が中程度のものを選択してその量を記録します。）

4. 酵素溶液の希釈倍数を決定します（色の変化をよりよく観察するために、適量の蒸留水を加えて総量を同じにし、よく混ぜて現象を観察し、適切なものを選択してその希釈倍数を記録します）。

5. 最適 pH の決定 (蒸留水でゼロに調整し、660nm で吸光度 A を測定し、最後に A を縦軸、pH を横軸としてプロットします。曲線の最低点に対応する pH 値が唾液アミラーゼの最適 pH 値です。)

上記の実験から、曲線の最低点に対応する pH 値は 6.8 であり、これが唾液アミラーゼの最適 pH 値であると結論付けることができます。ただし、アミラーゼ測定の結果は方法によって大きく左右されることに注意してください。唾液アミラーゼの最適pHをどのように決定しますか？方法によって基準値が異なります。臨床診療で使用される方法も多数あります。したがって、正しい診断を行うには、測定方法とその基準値を理解する必要があります。