胆汁酸の検査方法

臨床現場では、肝機能を調べる際に胆汁酸検査が必要になることがよくあります。これは、胆汁酸の生成と代謝が人間の肝臓の機能と密接に関係しているためです。一般的に、胆汁酸のレベルは人の肝臓の損傷の程度を判断するために使用できます。では、胆汁酸は臨床的にどのように検査されるのでしょうか?胆汁酸を調べるときに注意すべきことは何ですか？

総胆汁酸検査

胆汁酸の生成と代謝は肝臓と密接に関係しています。血清中の胆汁酸値は肝実質の損傷の重要な指標です。血清総胆汁酸（TBA）の測定は、肝疾患の診断に非常に役立ちます。

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総胆汁酸検査

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生化学検査

目次

1.1 正常値

2.2 臨床的意義

3.3 注記

正常値

空腹時、成人血清1-7μmol/L（3.5±1.75）。

臨床的意義

（１）急性肝炎：急性肝炎では血清中のTBAが著しく増加し、正常値の10～100倍、あるいはそれ以上に達することもあります。 Yang Changguo らは、60 人の健康な対照群の空腹時 TBA (F-TBA) レベルは 4.9±2.4 μmol/L、昼食後 2 時間の血清 TBA (P-TBA) レベルは 8.2±2.9 μmol/L であったと報告しました。急性期の急性肝炎 34 例の F-TBA レベルは 124.1±74.0 μmol/L、P-TBA レベルは 152.2±73.0 μmol/L であり、それぞれ正常上限の 13 倍と 11 倍であり、異常率は 100% でした。急性肝炎から回復したばかりの患者では、血清TBAはASTとほぼ同時に初期の高値から正常値まで低下します。低下し続けず、さらに上昇する場合は慢性疾患に発展する可能性があります。急性肝炎患者21名を追跡調査したところ、TBAが10μmol/L以下に回復した患者では、1年後に慢性肝炎の進行が認められなかった。しかし、TBAが増加しASTが正常まで低下した患者では、5例中4例が慢性肝炎を発症した。 （２）慢性肝炎：海外の研究では、慢性肝炎患者においてTBA値が20μmol/Lを超えると慢性活動性肝炎が疑われることが示唆されている。中国のYang Changguoらは、慢性持続性肝炎のp-TBAとF-TBAはそれぞれ23.6±12.5μmol/Lと7.7±4.6μmol/Lであるのに対し、慢性活動性肝炎ではそれぞれ111.3±45.1μmol/Lと78.7±38.9μmol/Lであると報告しました。慢性活動性肝炎のF-TBAとP-TBAは、慢性持続性肝炎よりも有意に高かったです。したがって、血清中の TBA 測定は、慢性肝炎の特定、および慢性活動性肝炎の予後と治療効果のモニタリングに非常に重要です。 （3）肝硬変：肝硬変では、肝臓の胆汁酸代謝能力が低下し、肝硬変のさまざまな段階で血清TBAが増加します。この増加は、肝硬変の後期であっても、一般的に慢性活動性肝炎よりも高くなります。肝疾患の活動性が最低レベルまで低下すると、ビリルビン、トランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼなどの指標は正常に戻りますが、血清TBAは依然として高いレベルのままです。 （4）アルコール性肝疾患：アルコール性肝疾患患者では血清TBAが上昇することがある。アルコール性肝疾患（肝硬変を含む）で重度の肝障害が発生すると、血清 TBA が著しく増加しますが、軽度または中等度の障害では増加は明らかではありません。アルコール性肝疾患における肝細胞障害の診断における血清 TBA 測定の信頼性と感度は、さまざまな酵素検査やガラクトース耐性検査よりもはるかに優れているという報告もあります。血清 TBA と β-ヘキソサミニダーゼをアルコール性肝疾患の診断指標として使用することが推奨されています。角野らは、アルコール性肝疾患患者が卵黄を摂取してから60分後に血清TBAが有意に増加したことを報告し、食後60分のTBA測定がアルコール性肝疾患の診断にはより有意義であると信じた。 （５）中毒性肝疾患：中毒性肝疾患の診断には、血清TBA測定が通常の肝機能検査よりも優れている。スチレンに曝露した23人の労働者のうち、11人の血清TBA濃度が上昇し、他の指標に異常が見られた人は3人だけだったと報告されています。また、臨床現場では、特定の治療薬の服用による肝中毒によって引き起こされる急性肝障害の診断にも意義があります。 （6）胆汁うっ滞：血清TBA測定は胆汁うっ滞の診断において高い感度と特異性を有する。急性肝炎、早期胆汁性肝硬変、新生児胆汁うっ滞、妊娠性胆汁うっ滞などの肝外胆管閉塞や肝内胆汁うっ滞はすべて TBA の増加を引き起こす可能性があります。胆管閉塞の初期段階では、胆汁分泌が減少し、血清 TBA が大幅に増加します。これは閉塞のさまざまな段階でほとんど変化しませんが、血清ビリルビン値は段階によって異なります。胆汁うっ滞患者の肝臓組織中の胆汁酸含有量は正常人に比べて著しく高く、CA は 8 倍、CDCA は 4 倍増加しますが、DCA はわずか 1.5% しか増加しません。肝外閉塞がドレナージによって緩和されると、血清中の TBA レベルは急速に低下し、他の指標はゆっくりと正常に戻ります。 全ての肝疾患において、食後の血清TBA濃度および異常率は空腹時よりも高いため、肝疾患の診断においては食後TBA測定の方が空腹時測定よりも感度が高い。食後 TBA のさまざまな肝疾患に対する診断感度と特異度は 100% と高く、空腹時血清 TBA の患者の 40% は正常範囲内であることが報告されています。急性肝炎が慢性肝炎に変化するかどうかは、食後のTBAレベルを継続的にモニタリングすることで慢性化の過程を観察することができます。慢性活動性肝炎が肝線維化変化を起こすかどうかにかかわらず、食後の継続的なモニタリングは、肝線維化のプロセスを理解し、肝生検を行わずに肝臓損傷の程度を判断するのに役立ちます。

予防

（１）血清中のLDは、基質（血清には一定量の乳酸が含まれている）の存在下でNAD+をNADHに還元し、その結果、ブランク値が高くなります。この方法では、ピルビン酸ナトリウムを添加して LD 活性を阻害し、ブランクの吸光度を効果的に低下させることができます。 （２）反応混合物中の成分濃度は、３α-HSD 5U/L、ジアホラーゼ500U/L、NAD+ 1mmol/L、NTB 0.2g/L、pH 7.50である。 （３）反応混合物の吸光度はタンパク質の影響を受けるため、グリココール酸ナトリウム標準溶液は混合血清で調製する。混合血清中の反応に関与する可能性のある元の胆汁酸やその他の物質は、P チューブを使用して除去する必要があります。 （4）3α-HSD製品にはジチオトレイトール（DTT）が含まれているため、酵素製剤の過剰使用はNTBの減少に影響を及ぼす可能性がある。 （５）この方法の直線性は250μmol/Lまでである。血清胆汁酸がこの値を超える場合は、適切な希釈を行う必要があります。 （6）ノイゲンET-180は、京都の第一工業製薬株式会社が製造する、化学名ポリオキシエチレンエーテルの非イオン性界面活性剤です。反応混合物に添加すると沈殿を防ぐことができ、3α-HSDおよびジアホラーゼの活性に影響を与えず、このアッセイシステムの感度にも影響を与えません。 （７）血清中のTBA含有量は低く、検体には大量の妨害物質が含まれており、その中で最も重要なのは乳酸脱水素酵素（LDH）である。 LDH は NAD+ の還元反応に影響を与える可能性があります。LDH によって生成される NADH の量は、TBA の関与による 3α-HSD 触媒反応によって生成される NADH の量よりもはるかに多いことがよくあります。あらゆるタイプの肝炎は血清LDHの上昇を引き起こす可能性があるため、測定中にLDHの影響を排除する必要があります。方法には、血清を67°Cで30分間加熱する、LDHの阻害剤としてシュウ酸を添加する、アルカリまたは酸処理、またはピルビン酸ナトリウムを使用してLDH活性を阻害するなどがありますが、ピルビン酸ナトリウム法が最も優れています。他の還元物質による干渉は、二重試薬を準備することで排除できます。まず、サンプルを 3α-HSD を含まないシステムでインキュベートし、サンプル内の干渉物質を反応させます。次に、3α-HSD を加えて TBA を反応させ、干渉を排除します。

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