乳酸脱水素酵素アッセイ

実生活にはさまざまな酵素があることはわかっています。これらの酵素は単独で作用したり、相互作用したりして、人体に大きな影響を与えます。しかし、酵素の測定方法については、皆さんはあまり詳しくないと思います。酵素が異なれば測定方法も異なり、方法も異なります。今日、乳酸脱水素酵素の測定方法は、多くの人々の研究テーマとなっています。では、どのように測定するのでしょうか？乳酸脱水素酵素の測定方法について学びましょう。

方法：

実験を始める前に、すべての試薬を事前に準備してください。試薬やサンプルを希釈するときは、均一に混合し、混合中に泡立たないようにしてください。各テストごとに標準曲線を作成する必要があります。サンプル濃度が高すぎる場合は、サンプル希釈液で希釈して、キットの検出範囲に合うようにしてください。

1. サンプルの追加: ブランクウェル、標準ウェル、テストするサンプル用のウェルをセットアップします。ブランクウェルにサンプル希釈液 100 μl を加え、残りのウェルに標準またはテストサンプル 100 μl を加えます。泡が入らないように注意してください。サンプルを ELISA プレートのウェルの底に加え、ウェルの壁に触れないように注意し、軽く振って混ぜ、ELISA プレートをカバーまたは覆い、37°C​​ で 120 分間反応させます。

実験結果の妥当性を確保するために、実験ごとに新しい標準溶液を使用してください。

2. 液体を捨て、脱水し、洗濯しないでください。各ウェルにビオチン標識抗体作業溶液 100 μl を加え (ビオチン標識抗体 1 μl をビオチン標識抗体希釈液 99 μl で調製し、穏やかに混合し、使用前 1 時間以内に調製する)、37°C​​ で 60 分間インキュベートします。

3. 60分間インキュベートした後、ウェル内の液体を捨て、遠心乾燥させ、プレートを3回洗浄し、毎回1〜2分間浸し、350μl/ウェルで遠心乾燥させます。

4. 各ウェルに100μlのホースラディッシュペルオキシダーゼ標識アビジン作業溶液（ビオチン標識抗体作業溶液と同じ）を加え、37°C​​で60分間インキュベートします。

5. 60分間インキュベートした後、ウェル内の液体を捨て、遠心乾燥させ、プレートを5回洗浄し、毎回1〜2分間浸し、350μl/ウェルで遠心乾燥させます。

6. 各ウェルに 90 μl の基質溶液を順番に加え、暗所で 37°C で発色させます (30 分以内に、標準の最初の 3 ～ 4 ウェルには肉眼で見える鮮明な青色のグラデーションが現れますが、最後の 3 ～ 4 ウェルのグラデーションは明らかでないため、プロセスを終了できます)。

7. 各ウェルに停止液 50 μl を加えて反応を停止します (青色がすぐに黄色に変わります)。停止溶液を加える順序は、基質溶液を加える順序とできるだけ同じにする必要があります。実験結果の正確性を確保するために、基質反応時間が終了したらできるだけ早く停止溶液を添加する必要があります。

8. 酵素免疫測定法（ELISA）を使用して、450 nmの波長で各ウェルの光学密度（OD値）を順番に測定します。 停止液を加えた後、15 分以内にアッセイを行ってください。

上記の内容は、乳酸脱水素酵素の測定方法について紹介しました。これらの内容は、皆様の興味を喚起できると信じています。誰もが乳酸脱水素酵素を効果的かつ迅速かつ直接的に測定できると信じています。あなたも研究愛好家かもしれませんので、急いで実践してください！