クレンブテロールを検出する方法は何ですか?

クレンブテロールはもともと気管支喘息の治療に使用されていましたが、人体への副作用が非常に深刻であるため、世界中で長い間禁止されてきました。しかし、多くの肉業者はコスト削減のため、これを飼料に使用しており、人間がこの残留物が付着した肉を長期間摂取すると、心臓血管系に悪影響を及ぼすことになります。

それによって悪性腫瘍が誘発されます。したがって、肉製品中のクレンブテロールの検出は発生源から制御する必要があります。現在、いくつかの検出方法があります。

ガスクロマトグラフィー質量分析法（GC-MS）

GC-MS法の利点は、クロマトグラフィーの効率的かつ迅速な分離効果と質量分析の高感度定性分析を組み合わせたことです。複数の残留物が同時に存在する場合でも、特定の残留物に対して定性分析と定量分析を実行でき、検出限界も高くなります。 Fente C. A らは GC-MS を使用して、牛の毛に含まれる CLB の残留物を最小検出限界 5 ng/g で検出しました。Pteer Batioens はガスクロマトグラフィー-タンデム質量分析 (GC-MS-MS) を使用して、牛、羊、豚の組織に含まれる CLB 含有量を最小検出限界 2 ng/g で検出しました。Liu Qi らは GC-MS (EI イオン源) を使用して、豚の尿に含まれる CLB を検出しました。検出限界は 0.5 ng/mL でした。Van Rhijin らは、トリメチルシリルまたは 2-ジメチルシリルモルホリン誘導体を使用して、尿抽出物に含まれる CLB を検出しました。誘導体は、より高い感度が得られる電気パルスまたは化学イオン化を使用してスキャンされました。さらに、GC-MS法はHPLC法と比較して検出感度が高く、偽陽性率が低いという特徴があります。そのため、我が国ではCLBを検出するための確認方法としてGC-MSを法的に確立しました（NY/T468~2001）。

高速液体クロマトグラフィー（HPLC）

HPLC は、熱的に不安定で極性が高い β 刺激薬とその代謝物の測定に適しています。さらに、HPLC はプレカラム抽出、精製、ポストカラム蛍光誘導体化反応、質量分析 (MS) システムと組み合わせることができ、分析プロセスを簡単に自動化できます。 Huang Shixinら（1995）は、豚の肝臓と豚肉中のCLB残留物を、λ=243nm、クロマトグラフィーカラム：shimpack CLC-ODS150×6.0mn、流速：1mL/分、カラム温度：室温30℃で紫外線検出器を使用して検出し、最小検出限界は2ng/gに達しました。海外ではHPLC（ダイオードアレイ検出器）を使用して動物性食品中のCLB残留物を測定した結果、最小検出限界は1.26ng/g、回収率は98.9%でした。現在、我が国では、CLB残留物を検出する半確認法としてHPLCを使用しており、最小検出限界は1～15 ng/gです。その利点は、特異性が良好で、選択性が強く、検出精度が高く、偽陽性率が低いことです。欠点は、サンプル処理時間が長く、検出プロセスが煩雑で困難であり、高価な機器が必要であり、実際の適用には一定の制限があります。

酵素免疫測定法（ELISA）

免疫抗原と抗体の特異的結合および酵素の効率的な触媒効果を利用して、植物性ホースラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）を化学的方法によりクレンブテロール（CL）と結合させ、酵素結合クレンブテロールを形成します。固相担体に塗布した抗体（ヒツジ抗ウサギIgG抗体）を特異的抗クレンブテロール抗体と結合させ、試験するクレンブテロールと酵素結合クレンブテロールを加え、クレンブテロール抗体と競合結合させる。洗浄後、基質を加え、呈色物質の変化から試験するクレンブテロールの量を測定する。検査するクレンブテロールの量が多いと、酵素結合クレンブテロールの量は少なくなり、着色物質の量も少なくなります。サンプル中のクレンブテロール含有量は、目視検査または比色分析によって測定されました。比色分析の最適波長は 450 nm であり、基準波長は 600 nm より大きくなければなりません。

金コロイド免疫クロマトグラフィー

競合コロイド金免疫クロマトグラフィー技術を使用して、試験溶液中の Clen が金標識パッド上の金標識抗体と結合して複合体を形成します。試験溶液中の Clen の濃度が感度値より低い場合、結合していない金標識抗体は T ゾーンに流れ、膜上に固定された Clen-BSA 複合体に結合し、徐々に凝集して目に見える T ラインになります。Clen の濃度が感度値より高い場合、すべての金標識抗体が複合体を形成し、T ラインで Clen-BSA 複合体と結合しなくなり、目に見える T ラインが形成されます。固定されていない複合体は T ゾーンを通過し、C ゾーンの二次抗体によって捕捉され、目に見える C ラインを形成します。ライン C の出現は免疫クロマトグラフィーが起こったことを示し、試験紙が有効であることを意味します。

折り曲げ試験方法

1. 試験前に取扱説明書をよく読み、試薬プレートとサンプル溶液を室温に戻してから使用してください。

2. アルミ袋を破り、試験紙を取り出します。

3. モデルに従って操作します（尿が観察領域に直接浸らないようにする必要があります）。

3.1 試験紙の白い端を尿に浸し（液面が水平線を超えないようにする）、5秒間そのままにします。

3.2 スポイトを使用して検査する尿サンプルを吸い取り、サンプルウェルにサンプルを 3 滴ずつゆっくりと追加します。

4. テストストリップを 1 分間平らに置き、赤いストリップが表示されるまで待ちます。

5. 3〜8分以内に結果を読み取ります。10分を過ぎると結果は無効になります。

6. 10分以内に結果が得られます

折り畳み結果の解釈

陽性（+）：品質管理領域（C）に赤紫色の帯のみが表示されます。テスト領域（T）には赤紫色の帯は現れませんでした。

陰性（-）：2 つの赤紫色の帯が現れます。 1 つはテストエリア (T) にあり、もう 1 つは品質管理エリア (C) にあります。

無効: 品質管理領域 (C) に赤紫色の帯が表示されない場合は、テストが失敗したか、テスト用紙の有効期限が切れていることを示します。

注意: テスト領域 (T) の赤紫色の帯には、異なる色合いが表示される場合があります。ただし、規定の観察時間内であれば、バンドの色の濃さに関わらず、非常に弱いバンドであっても陰性の結果と判断する必要があります。

折り紙ノート

1. テストカードは有効期限内に1回ご使用ください。

2. テスト中は直射日光や扇風機を避けてください。

3. テストカードの中央にある白いフィルムの表面に触れないようにしてください。

4. 交差汚染を避けるため、尿サンプルスポイトは混ぜないでください。

5. 尿サンプルに沈殿物や濁りがある場合は、検査前に遠心分離してください。

液体クロマトグラフィー質量分析法/質量分析法 (HPLC-MS/MS)

SN/Tを参照

1924-2007 輸出入用動物由来食品中のクレンブテロール、ラクトパミン、サルブタモール、テルブタリン残留物の検出方法。

この規格は、動物由来食品の筋肉および内臓中のクレンブテロール、ラクトパミン、サルブタモール、およびテルブタリン残留物の検出に適用されます。

サンプル中の薬物残留物は、pH 5.2 の酢酸アンモニウム緩衝液で抽出され、β-グルクロニダーゼ-アリールチオエステラーゼが酵素加水分解のために添加されました。抽出物は C18 および SCX ダブル SPE カラムで精製され、液体クロマトグラフィー質量分析法で測定され、内部標準法で定量されました。