タンパク質は生命にとって重要な概念です。食べ物にはタンパク質が豊富に含まれており、人体は生命を維持するために毎日大量のタンパク質を必要とします。現代の科学技術の進歩に伴い、タンパク質に関する研究はますます深まり、微視的なタンパク質研究の成果も現れています。たとえば、タンパク質相互作用の研究は比較的重要なテーマです。タンパク質相互作用とは何かを見てみましょう。 タンパク質間相互作用とは、2 つ以上のタンパク質分子が非共有結合によってタンパク質複合体を形成するプロセスを指します。タンパク質間相互作用は、細胞の生化学反応ネットワークの主要な構成要素を構成し、細胞とそのシグナルの調節において非常に重要です。 タンパク質相互作用研究は、実験目的に応じて 2 つのカテゴリに分けられます。1 つは 2 つのタンパク質間に相互作用があるかどうかを確認することであり、もう 1 つは対象のタンパク質の相互作用するタンパク質をスクリーニングすることです。
(1)プローブタンパク質の性質と相互作用タンパク質の供給源:プローブタンパク質の性質:プローブタンパク質は、全長タンパク質、相互作用関連ドメイン、または化学合成によって合成されたより小さな生物学的に活性な断片である可能性がある。相互作用するタンパク質の供給源: プローブタンパク質を内因的に発現することが知られている細胞株は、プローブタンパク質と相互作用するタンパク質を探索するための理想的な実験材料です。 (2)細胞溶解液の調製:粗細胞抽出物の調製を成功させるための重要な要素としては、細胞溶解方法、pH制御、温度、タンパク質分解の回避などが挙げられる。これらはすべて、細胞溶解条件を最適化するために予備実験を複数回繰り返す必要があります。組み換えタンパク質を抽出するために細胞を破壊する必要がない場合もあります。たとえば、多くの高発現哺乳類細胞株(特にチャイニーズハムスター卵巣細胞、CHO 細胞)および酵母細胞株は、組み換えタンパク質を分泌するように設計されており、細胞馴化培地および培養濾液から直接組み換えタンパク質を精製することが可能になっています。これらの方法を使用して「プロテアーゼフリー環境」を得るには、大量の細胞培養培地をできるだけ早く濃縮することが重要です。 |
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