細胞凍結培地の配合は何ですか?

科学技術の継続的な発展に伴い、医療技術も絶えず向上しています。数年前に起きた人間冷凍事件は、世界の目を開かせました。食品だけでなく、人体も冷凍保存できることが判明したのです。この目標を達成するには、セル冷却液が必要です。これをどのように構成するのでしょうか? セル凍結液の配合について詳しく見てみましょう。

（I）細胞凍結保存

1. 10% DMSO またはグリセロールと 10～20% 子牛血清を含む凍結培養培地を準備します。

2. 対数増殖期の細胞を取り出し、古い培地を除去し、PBSで洗浄します。

3. PBSを除去し、適量のトリプシン（培養皿の表面を覆う）を加えて細胞の単層を消化します。

4. 1000rpmで5分間遠心分離する。

5. トリプシンを取り除き、調製した凍結培地を適量加え、ピペットで軽く吹き飛ばして細胞を均一にし、計数し、凍結培地中の細胞の最終密度を5×106/ml～1×107/mlに調整します。

6. 細胞を凍結保存チューブに1～1.5 mlずつ分注します。

7. 凍結保存チューブに細胞名、凍結時間、操作者をラベルします。

8. 凍結保存: 標準的な凍結保存手順は、冷却速度が -1 ～ -2°C/分です。温度が -25°C 未満になると、-5°C ～ -10°C/分に上げることができます。-100°C に達すると、すぐに液体窒素に浸すことができます。あるいは、細胞が入ったクライオチューブを -20°C の冷蔵庫に 2 時間置き、その後 -70°C の冷蔵庫に一晩置き、クライオチューブを取り出して液体窒素容器に入れることもできます。

（II）細胞回復

1. クライオバイアルを液体窒素容器から取り出し、37℃のお湯に直接浸し、時々振ってできるだけ早く溶かします。

2. クライオチューブを37℃のウォーターバスから取り出し、蓋を開けてピペットで細胞懸濁液を吸い出し、遠心チューブに加え、10倍の培養培地を加えてよく混ぜます。

3. 遠心分離機（1000rpm、5分）

4. 上清を捨て、10% 子牛血清を含む培養培地を加えて細胞を再懸濁し、細胞数を数えて細胞密度を調整し、培養フラスコに接種して 37°C インキュベーターで培養します。

5.翌日培地を交換し、培養を続けます。

予防

1. 増殖段階から高密度単層形成までの培養細胞を凍結保存に使用できますが、対数増殖期の細胞が好ましいです。凍結する前に、培養培地を 1 日 1 回交換するのが最適です。

2. クライオチューブを液体窒素容器に入れるときや液体窒素容器から取り出すときは、凍傷を防ぐための保護措置を講じてください。

3. 凍結および解凍には、新しく調製した培地を使用するのが最適です。